氧化损伤对视网膜色素上皮细胞三联组氨酸核苷结合蛋白1（HINT1）表达的影响

Objective　To investigate the effects of hydrogen peroxide （H2O2） on the expression of histidine triad nucleotide-binding protein 1 （HINT1） in oxidative damaged retinal pigment epithelial （RPE） cells in vitro.Methods　ARPE-19 cell line was cultured conventionally and treated with six different concentrations of H2O2 including 0 μmol·L-1H2O2 （control group），50 μmol·L-1H2O2，100 μmol·L-1H2O2，200 μmol·L-1H2O2，400 μmol·L-1H2O2，600 μmol·L-1H2O2of treatment groups．Live/Dead fluorescent staining and MTT were utilized to evaluate cell viability and proliferative capacity，respectively.The expression of HINT1，BAX and BCL-2 in RPE cell were examined by western blot.Results　The death rates of RPE cells treated with 0 μmol·L-1，50 μmol·L-1，100 μmol·L-1，200 μmol·L-1，400 μmol·L-1 and 600 μmol·L-1 of H2O2 for 6 h were （0.35±0.11）%，（2.03±0.87）%，（3.76±1.41）%，（12.17±1.26）%，（17.69±2.24）%，（25.22±0.59）%，respectively，which significantly increased in a dose-dependent manner （P<0.05）.The proliferation rates of RPE cell treated with 0 μmol·L-1，50 μmol·L-1，100 μmol·L-1，200 μmol·L-1，400 μmol·L-1 and 600 μmol·L-1 of H2O2 were （40.72±2.71）%，（37.75±0.62）%，（35.30±0.68）%，（34.10±0.74）%，（33.61±0.71）%，（31.05±1.41）%，respectively presenting with reduced proliferation ability in a dose-dependent manner （P<0.05）.With the increase of H2O2 concentration，BAX protein level gradually increased （P<0.01），while anti-apoptotic protein BCL-2 gradually decreased （P<0.01）；The relative ratio of BAX/BCL-2 enhanced 1.85-fold（50 μmol·L-1 H2O2），2.35-fold（100 μmol·L-1 H2O2），2.86-fold（200 μmol·L-1 H2O2），3.97-fold（400 μmol·L-1 H2O2），8.50-fold（600 μmol·L-1 H2O2），respectively compared with control group；The level of HINT1 significantly decreased in H2O2 treated RPE cells in a dose dependent manner （P<0.01），with decreased 0.78-fold（50 μmol·L-1 H2O2），0.59-fold（100 μmol·L-1 H2O2），0.45-fold（200 μmol·L-1 H2O2），0.42-fold（400 μmol·L-1 H2O2），0.38-fold（600 μmol·L-1 H2O2），respectively compared with control group.Conclusion　Oxidative injured RPE cells induced by different concentrations of H2O2 show decreased cell viabilities and increased level of apoptosis-related proteins.Meanwhile，the expression of HINT1 in RPE cells is down-regulated after treatment of H2O2，indicating HINT1 may play an important role in the pathogenesis of age-related macular degeneration （AMD） by regulating apoptosis.This research provides potential target for AMD therapy and drug development.